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草甘膦的除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成,最终导致植物死亡.但它的使用有时也会影响到农作物的正常生长.目前,已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,
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问题描述:

草甘膦的除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成,最终导致植物死亡.但它的使用有时也会影响到农作物的正常生长.目前,已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,若将该基因转入农作物植物细胞内,从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦.

(1)将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后,反应管中有___种DNA片段.

(2)假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列,现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒,则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割,并获得所需重组质粒吗?___ 请说明理由___.

(3)若上述假设成立,并成功形成重组质粒,则重组质粒___

A.既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开 B.能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C.既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开 D.能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

(4)要想检测导入的EPSPS基因是否表达,在分子水平上可用___方法进行检测.

吕锋回答:
  (1)图①中,从苏云金杆菌的DNA被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成3种DNA片段.而质粒被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成2种DNA片段,其中有1种与目的基因相同,所以反应管中有4种DNA片段.   (2)据图分析,由于BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同,质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为限制酶BclⅠ的碱基序列,用BclⅠ和HindⅢ切割质粒,用BamHⅠ和HindⅢ切割目的基因,仍能获得重组质粒.(3)根据酶切位点和识别的碱基序列可知,重组质粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开.(4)图中②过程所用的酶为DNA连接酶,作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键.   (4)检测目的基因是否在受体细胞内表达的分子水平上的检测是向分泌物中加入抗体,通过抗原-抗体特异性结合形成杂交带加以检测,如果能形成说明表达,如果不能形成说明没有表达.   故答案为:   (1)4   (2)能    切割后露出的黏性末端相同   (3)D   (4)抗原-抗体杂交
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