Rag2基因缺失小鼠因不能产生Rag2蛋白，导致其不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：（1）步骤①中，在核移植前
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问题描述：
Rag2基因缺失小鼠因不能产生Rag2蛋白，导致其不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：
（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的___（结构）．
（2）培养细胞过程中，要置于CO2培养箱中，中CO2的主要作用是___，与培养植物细胞相比，培养基中特有的成分是___．
（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体．可以根据Rag2基因的___设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___酶的酶切位点．将构建好的基因表达载体导入ES细胞的方法是___
（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗___的抗体进行杂交实验．
孟卓回答：
（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）培养细胞过程中，要置于CO2培养箱中，CO2的主要作用是调节培养液PH，与培养植物细胞相比，培养基中特有的成分是动物血清．
（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；DNA复制只能从5’到3’，因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物．由图可知，SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．将构建好的基因表达载体导入ES细胞的方法是显微注射法．
（4）为检测Rag2基因是否表达，可以采用抗原-抗体（Rag2蛋白）杂交法．
故答案为：
（1）细胞核
（2）调节培养液PH 动物血清
（3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ限制酶
（4）Rag2蛋白
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