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已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列,编码β-半乳糖苷酶的α肽.而宿主细胞含有IacZ+的突变基因,其产物无β-半乳糖苷酶活性,但遇α肽,可发生α-互补作用,产生有活性的酶,使培养
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问题描述:

已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列,编码β-半乳糖苷酶的α肽.而宿主细胞含有IacZ+的突变基因,其产物无β-半乳糖苷酶活性,但遇α肽,可发生α-互补作用,产生有活性的酶,使培养基中的无色物质X-Gal分解,菌落呈蓝色;若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中,失去α-互补作用(注:宿主细胞菌落为白色).图1为pUC质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点,tctR为四环素抗性基因,P为启动子、T为终止子,ori为复制原点.图2表示目的基因的两端分别有EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点.为获得目的菌株,请分析回答下列问题:

(1)为快速筛选目的基因,应将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用___酶切,酶切产物用___进行连接后将得到的混合物直接导入受体菌中,培养受体菌有的未被转化(用A表示),有的被转化,被转化的菌株有三种(B含环化目的基因的菌株 C含质粒载体的菌株 D含插入了目的基因的重组质粒的菌株).

(2)为筛选出插入了目的基因的菌株,需要将宿主细胞接种在含有___的培养基中.

(3)在培养基中,不能生长的菌株为___;产生蓝色菌落的菌株为___;产生白色菌落的菌株为___(请用(1)中的A、B、C、D字母作答).

(4)基因工程中除质粒作为基因载体外,还可用动植物病毒和___.

丁元明回答:
  (1)由于被转化的菌株有三种,并且含环化目的基因的菌株,因此目的基因切割时用了同一种限制酶切割,即将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切,酶切产物用DNA连接酶进行连接后将得到的混合物直接导...
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