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【如图1为某种常用质粒的序列图,LacZ基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列.请回答下列问题:(1)若要筛选】
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问题描述:

如图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列.请回答下列问题:

(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有___,构建重组质粒时需要的工具酶有___,对获取的目的基因可用PCR技术对其扩增.

(2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了___.没有导入任何外源DNA的大肠杆菌___(填“能”或“不能”)在该培养基上生存.

(3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的___种DNA片段.

米契回答:
  (1)由于Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,Amp为氨苄青霉素抗性基因,所以若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有X-gal和氨苄青霉素.构建基因表达载体时,首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体,其次用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA.   (2)构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,由于Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入的是不含目的基因的空白质粒.若大肠杆菌菌落显白色,说明Lac Z基因被破坏,不能编码相应的酶,所以导入的是重组质粒.没有导入任何外源DNA的大肠杆菌不含氨苄青霉素抗性基因,所以不能在该培养基上生存.   (3)BamH I和Bgl II两种限制酶切割形成的黏性末端相同,可在DNA连接酶的作用下连接起来.若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,可能会发生正向连接,也可能会发生反向连接.用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,若正向连接,切割后会得到两种长度不同的DNA片段,若反向连接,切割后会得到另外两种长度不同的DNA片段.因此,用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的4种DNA片段.   故答案为:   (1)X-gal 氨苄青霉素 限制酶、DNA连接酶   (2)没有目的基因的空质粒 不能   (3)4
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