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4、假如你进入实验室开始研究一个小鼠DNA结合蛋白的生物学功能:(1)、请设计实验确定其编码基因在小

4、假如你进入实验室开始研究一个小鼠DNA结合蛋白的生物学功能:

(1)、请设计实验确定其编码基因在小鼠细胞内的表达水平?

(2)、请设计实验确定该蛋白的那个结构域具有DNA结合功能?

(3)、如何确定该蛋白在小鼠体内(invivo)的生物学功能.

刘晓冬回答:
  (1)基因的表达水平用northernblot吧,从氨基酸序列逆推cDNA做探针.   (2)构建一个载体,上面有编码不同结构域的DNA和LacZ激活子DNA,形成不同的domain和LacZ激活子的activationdomain融合蛋白.然后LacZ操纵子后面加个报告基因.如果是某个domain有结合功能的话,报告基因就会表达.   (3)反向遗传学方法,用定点诱变直接突变掉相应的基因,获得携带一个突变的小鼠.然后通过杂交获得双突变的小鼠,看看它和正常的小鼠有不同.
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