如图是转基因小鼠的培育过程示意图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：（1）过程①需要用到___酶．过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是__

如图是转基因小鼠的培育过程示意图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：（1）过程①需要用到___酶．过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是___培养胚胎干细胞的培养液中除加

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问题描述：

如图是转基因小鼠的培育过程示意图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）过程①需要用到___酶．过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是___培养胚胎干细胞的培养液中除加人各种营养物质外，通常还需加入___

（2）表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、___、___、终止子和复制原点等

（3）自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或___中分离出来的一类细胞胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，细胞核仁明显；在功能上具有___性

（4）图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是B抗生素（对细胞有毒害作用），培养液添加G418的目的是___

（5）图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的___位置；步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是___

（6）检测目的基因是否翻译成蛋白质，可从小鼠c体内提取蛋白质，用___杂交的方法加以检测．

鹿旭东回答：

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　　（1）①为基因表达载体的构建，是转基因技术的核心步骤，需要限制酶切割目的基因和载体，同时需要DNA连接酶链接形成重组DNA．受体细胞是动物细胞，常用显微注射法将目的基因导入胚胎干细胞．早期胚胎培养过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸，葡萄糖、还要加入动物血清等天然成分．　　（2）为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体包括复制原点、启动子、终止子、目的基因、标记基因等．　　（3）胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）．具有胚胎细胞的特性，体积较小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞．另一方面，在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造．　　（4）G418是B抗生素（对细胞有毒害作用），培养液添加G418的目的是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素基因．　　（5）图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的内细胞团，内细胞团以后发育成胚胎，步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是使其同期发情，有相同的生理基础．　　（6）检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交．　　故答案为：　　（1）DNA连接酶显微注射法血清（血浆）　　（2）标记基因启动子　　（3）原始性腺发育的全能　　（4）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞　　（5）内细胞团使其同期发情　　（6）抗原-抗体