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16sRNA的一些问题16sRNA的通用引物好像有很多不同的序列段,不知道该如何选择,而且我还想知道,为什么16sRNA测序之前必须要用载体转化,为什么不能PCR跑胶之后回收,然后直接测序呢?
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问题描述:

16sRNA的一些问题

16sRNA的通用引物好像有很多不同的序列段,不知道该如何选择,而且我还想知道,为什么16sRNA测序之前必须要用载体转化,为什么不能PCR跑胶之后回收,然后直接测序呢?

贝超回答:
  PCR产物直接测序是用PCR引物进行测序,   而测序两端引物结合位点会有几十个碱基读不出来.   这个是目前技术问题,所有公司的测序仪器都读不出来.   而TA克隆之后就是用载体的通用引物测序,   因为载体的序列是知道的,   所以即使两端有一部分读不清   也没有关系,   这样两个反应就可以测通拼接得到全长序列了.
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