胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛|初中生物问答-字典翻译问答网

胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛

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问题描述：

胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白），请回答下列问题：

（1）图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是___．

（2）图1中启动子是___酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达，氨苄青霉素抗性基因的作用是___．

（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有___．

（4）β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于___．

（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β-半乳糖苷酸被切成多个肽段，这是因为___．

（6）根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量，你得推测结果是___，理由是___．

董亚卓回答：

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　　（1）根据题意和图示分析可知：图1基因表达载体中已有目的基因、启动子和标记基因，所以没有标注出来的基本结构是终止子．　　（2）图1中启动子是RNA聚合酶酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达即转录过程；氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来．　　（3）构建基因表达载体的过程中，必须用相同的限制酶切割（含目的基因的外源DNA分子）和运载体，以产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．　　（4）β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，这样可以防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解．　　（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，由于β-半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸，所以用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β-半乳糖苷酸被切成多个肽段．　　（6）由于一个肽链中至少有一个游离的氨基和一个游离的羧基，在肽链内部的R基中可能也有氨基和羧基，而胰岛素含有A链和B链，所以每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量至少是2个．　　故答案为：　　（1）终止子　　（2）RNA聚合酶作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来　　（3）限制酶和DNA连接酶　　（4）防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解　　（5）β-半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸　　（6）至少2个两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸R基团中可能还含有游离的氨基