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【Tris缓冲液的溶液中为什么不能加入DEPC】
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问题描述:

Tris缓冲液的溶液中为什么不能加入DEPC

李伟回答:
  貌似DEPC就能和巯基发生反应吧   25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4min(pH6)、9min(pH7).Tris缓冲液中DEPC的降解会加快,25℃时,半衰期为1.25min(pH7.5)、0.37min(pH8.2).DEPC加入到水中之后并不会立即溶解,而是形成小的球状液滴(类似于油滴),需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀.此时的溶液才可以拿去高温除菌除DEPC.一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去.(试验所用试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度,然后剧烈振荡10分钟,再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性)   巯基,羟基,咪唑基都会被氧化掉   所以配TRIS的水如果需要用depc消毒,就必须高温高压(灭菌)处理
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