2007年诺贝尔生理学或医学奖分别授予美国人马里奥•卡佩基、奥利弗•史密斯和英国人马丁•埃文斯．3位科学家的获奖原因是其研究为“基因靶向”技术的发展奠定了基础．所谓“基因靶
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问题描述：
2007年诺贝尔生理学或医学奖分别授予美国人马里奥•卡佩基、奥利弗•史密斯和英国人马丁•埃文斯．3位科学家的获奖原因是其研究为“基因靶向”技术的发展奠定了基础．所谓“基因靶向”技术（人们大都称之为基因“敲除”技术）是指利用细胞脱氧核糖核酸（DNA）可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质，定向改造生物某一基因的技术．借助这一从20世纪80年代发展起来的技术，人们得以按照预先设计的方式对生物遗传信息进行精细改造．有了“基因靶向”这一高精度瞄准镜，科学家就可以精确瞄准任何一个基因，使其失去活性，进而研究该基因的功能．请回答下列问题：
（1）“敲除”一种基因需要分两步来完成：第一步是利用化学“剪刀”，例如用某种酶切除哺乳动物染色体中有某种功能的基因．第二步是用修改过的基因取代原有基因．这里的“某种酶”应该是___酶．用修改过的基因取代原有基因时还需要___酶．
（2）假如要“敲除”小鼠的胰岛素基因，请设计出实验步骤：___．
给出一种检验胰岛素基因是否被“敲除”的方法：___．
（3）利用细胞工程也可获得可供移植之用的“敲除排斥基因”的老鼠，其过程大致如图所示：
①促进卵细胞融合最常用的试剂是___．
②重组细胞培养成胚胎的过程所用的培养基，从物理性质上看属于___培养基，培养基中至少要加入水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、促生长因子、微量元素和___等物质，同时要创造适宜温度、pH和无菌条件，其中需要无菌环境的原因是：___．
黎亚元回答：
（1）基因工程中，一般用限制酶切割基因，或者叫获取目的基因，用DNA连接酶连接目的基因和运载体，即用修改过的基因取代原有基因时还需要DNA连接酶．
（2）假如要“敲除”小鼠的胰岛素基因，需要用限制性核酸内切酶切除小鼠胚胎干细胞中的胰岛素基因，用修改过的基因取代胰岛素基因．检验胰岛素基因是否被“敲除”的方法：用胰岛素基因探针检验胰岛素基因是否被“敲除”．
（3）①促进卵细胞融合最常用的试剂是聚乙二醇．
②重组细胞培养成胚胎的过程所用的培养基，从物理性质上看属于液体培养基，培养基中至少要加入水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、促生长因子、微量元素和动物血清等物质，同时要创造适宜温度、pH和无菌条件，需要无菌环境的原因是细菌等微生物生长繁殖快，消耗营养物质多，同时产生有害代谢产物，毒害动物细胞．
故答案为：
（1）限制性核酸内切 DNA连接
（2）用限制性核酸内切酶切除小鼠胚胎干细胞中的胰岛素基因，用修改过的基因取代胰岛素基因．
用胰岛素基因探针检验胰岛素基因是否被“敲除”
（3）①聚乙二醇
②液体 动物血清 细菌等微生物生长繁殖快，消耗营养物质多，同时产生有害代谢产物，毒害动物细胞
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