每种物质都有特异的摩尔消光系数,可通过Lambert-Beer定律换算
A=εbc
式中:A—消光度(又称光密度、消光值),
ε—摩尔消光系数(其物理意义为:当吸光物质浓度为1摩尔/升,吸收池厚为1厘米,以一定波长原光通过时,所引起的消光值A),b—吸收介质的厚度(厘米)
c—消光物质的浓度(摩尔/升).则:
c=A/(εb),式中A可直接测定,b是已知的,ε可取蛋白质的消光系数,即可求出c(浓度,摩尔/升).因已知体积(升),溶液中底物重量(g)也已知,则:重量除以蛋白质的mol(可查表),即得底物的摩尔数.