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怎样提取豆类中的蛋白质
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怎样提取豆类中的蛋白质

史秀河回答:
  一、植物组织蛋白质提取方法   1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上.   2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时).   3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃   4、提取上清夜,样品制备完成.   蛋白质提取液:300ml   1、1Mtris-HCl(PH8)45ml   2、甘油(Glycerol)75ml   3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g   这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!   二、植物组织蛋白质提取方法   三氯醋酸—丙酮沉淀法   1、在液氮中研磨叶片   2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清.   3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用.   4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用.   5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用.   药品:   提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮   裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml.   这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
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