①观察洋葱根尖有丝分裂实验,细胞在解离期在由15%的盐酸和95%的酒精组成的解离液,使得细胞死亡,①错误;
②观察植物细胞的质壁分离及质壁复原实验中,原生质层必须保持选择透过性,如果细胞死亡将不会出现质壁分离复原,所以此实验需保证细胞处于生活状态,②正确;
③探究酵母菌细胞呼吸的方式,有氧进行有氧呼吸,无氧进行无氧呼吸,细胞细必须保持活性,③正确;
④恩格尔曼用水绵观察光合作用的场所是叶绿体,必需保持活性,如果细胞死亡,光合作用将无法进行,④正确;
⑤高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动,所以细胞必须处于生活状态,⑤正确;
⑥观察DNA和RNA在细胞中的分布时,加入8%的盐酸进行水解,使得细胞失去活性,⑥错误.
故选:C.