公式是根据测量结果自己算出来的:
考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立的1种测定微量蛋白质的方法L5],考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成的蓝色蛋白质一染料复合物,在595nm处有最大吸光度,复合物1h内保持稳定.在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质一染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质含量的测定.
测定时,用同一种标准蛋白(自己选,如牛血清白蛋白,所选的标准蛋白最好是纯化的待测蛋白——但这是理想状态,一般选择氨基酸构成与待测蛋白相近的标准蛋白.否则将影响测定结果)配制成覆盖待测样品蛋白浓度的标准蛋白溶液,然后加等量考马斯亮蓝G-250,混匀后用紫外分光光度计测定个标准蛋白样品的吸光值.并测定待测样品(可稀释成几个不同浓度的样品同时测)的吸光值.所有样品重复测三次.
最后以蛋白标准溶液浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线.计算出回归方程.如Y=aX+b
让后把待测样品的吸光值代入回归方程,算出待测样品浓度.
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