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大鼠的肺组织做western前怎么处理,我的其中要检测的蛋白有磷酸化的,需要加磷酸酶抑制剂吗?
5人问答
问题描述:

大鼠的肺组织做western前怎么处理,我的其中要检测的蛋白有磷酸化的,需要加磷酸酶抑制剂吗?

丁建强回答:
  液氮冷冻然后研磨成粉末然后按细胞提取蛋白步骤处理即可就是加裂解液然后95°煮10分钟再加Loadingbuffer   需要加磷酸化酶抑制剂
孙良新回答:
  能具体一些吗,我第一次裂解组织从未做过实验。希望您可以吧裂解液和组织的比例,还有磷酸酶抑制剂的用量,以及煮蛋白和buffer的比例告诉我,好吗,谢谢!
丁建强回答:
  没有称过组织多重哎反正就是很小很小一块最终大概弄成300ul的量各加多少就得看你每个试剂是多少X的了
孙良新回答:
  如果是1g的组织,我应该用多少各种液体啊,谢谢!裂解组织需要加原凡酸钠吗?
丁建强回答:
  之前做没有称过所以你就配成300ul最终就可以了大概200ul的1X的裂解液,100ul3X的loadingbuffer,没加过那个如果你看什么文献上有加的也可以加吧
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