14kd的westernblot
我做的蛋白分子量为14.4kd,用的是15%的分离胶,100V电泳一小时,5%BSA封闭一小时,一抗(1:200)4度过夜,TBST洗膜四次,每次十分钟.二抗(1:5000)室温一小时,经洗膜显色,背景较深,等荧光变弱时也没有任何条带出现
一抗为santa公司的,
请各位大虾给点建议