观察下图,回答如下问题:
(1)步骤①和②中常用的工具酶是__________和__________。
(2)图中质粒上有抗氨苄青霉素和抗四环素两个标记基因,经过①和②步骤后,有些质粒上的__________基因内插入了外源目的基因,形成重组质粒,由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。
(3)步骤③是_______________的过程,为了促进该过程,应该用_____处理大肠杆菌。
(4)步骤④:将二角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养,目的是筛选____________________,能在C中生长的肠杆菌有___种。
(5)步骤⑤:用无菌牙签桃取C上的单个菌落,分别接种到C(含氨苄青霉素和四环素和E(含四环素)两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于___(D、E)上,请在图中相应的位置上圈出来。