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双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的
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问题描述:

双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的

黄国建回答:
  模板DNA几百ng-几ug,区别不大   酶10.5ul   酶20.5ul   buffer去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA   水补足20ul   30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度.   注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.
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