科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄的耐寒能力大大提高.图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图,图二为质粒限制酶酶切图谱.鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列,Ampr为抗氨苄青霉素基因,其中①-④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞.请据图作答:
(1)为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的___之后.图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___过程.
(2)在构建基因表达载体时,可用一种或者多种限制酶进行切割.在此实例中,应该选用___限制酶切割.
(3)要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应使基因表达载体Ⅰ中含有___作为标记基因.
(4)研究人员通常采用___法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.